Ko te tātari rewharewha he waahanga nui i roto i te karu karu rere.E toru nga whiriwhiringa taketake o te punaha tikanga: he tātari whakaongaonga, he tātari tuku me te whakaata dichroic.I te nuinga o te wa ka kohia ki roto i te mataono kia whakauruhia te roopu ki roto i te karu.
He pehea te mahi a te tātari rewharewha?
Tātari Whakaoho
Ka tukuna e nga whiriwhiringa whakaoho te marama o tetahi roangaru motuhake me te aukati i etahi atu roangaru.Ka taea te whakamahi ki te whakaputa i nga tae rereke ma te tarai i te tātari kia kotahi noa te tae.Ka tae mai nga whiriwhiringa whakahihiri i roto i nga momo matua e rua - nga whiriwhiringa haere roa me nga whiriwhiringa paahi roopu.Ko te mea whakahihiri he tātari bandpass e haere ana i nga roangaru e mau ana e te fluorophore, na reira ka whakaiti i te hihikotanga o etahi atu puna o te rewharewha me te aukati i te rama whakakorikori i roto i te roopu tukunga.E whakaatuhia ana e te raina kikorangi i te ahua, ko te BP ko 460-495, ko te tikanga ka taea anake te haere i roto i te rere o te 460-495nm.
Ka whakanohohia ki roto i te ara whakamarama o te karu karu rama me te tātari i nga roangaru katoa o te puna marama engari mo te awhe whakakorikori fluorophore.Ko te iti o te tātari tuku e tohu ana i te kanapa me te kanapa o nga whakaahua.Ko te iti rawa o te 40% te tuku mo tetahi tātari whakaongaonga e taunaki ana kia pai ai te tuku > 85%.Ko te bandwidth o te tātari hihiko kia noho katoa ki roto i te awhe hihiko fluorophore kia tata ai te roangaru o waenganui (CWL) o te tātari ki te roangaru whakakorikori teitei o te fluorophore.Ko te tātari whakaihiihi kiato whatu (OD) e tohu ana i te pouri o te ahua o muri;Ko te OD he ine mo te pai o te tātari i te aukati i nga roangaru i waho o te awhe tuku, te bandwidth ranei.Ko te OD iti rawa o te 3.0 e taunaki ana engari ko te OD o te 6.0 neke atu ranei he pai.
Tātari Tukunga
Ko nga whiriwhiringa tukunga te kaupapa o te tuku i te rewharewha e hiahiatia ana mai i te tauira kia tae atu ki te kairapu.Ka aukati ratou i nga roangaru poto ake, he nui te tuku mo nga roangaru roa.Ko te momo tātari e hono ana ki tetahi tau, penei i te BA510IF i te ahua (tatari arai pokanoa), e tohu ana taua tohu ki te roangaru i te 50% o tona tukunga teitei.
Ko nga taunakitanga ano mo nga whiriwhiringa whakaoho e mau ana mo nga whiriwhiringa tukunga: te tuku iti, te bandwidth, OD, me te CWL.Ko te tātari tukunga me te CWL pai, te tuku iti, me te whakakotahitanga OD e whakarato ana i nga whakaahua kanapa rawa atu, me te aukati hohonu rawa atu, me te whakarite kia kitea nga tohu tukunga ngoikore.
Whakaata Dichroic
Ka whakanohohia te whakaata dichroic ki waenga i te tātari whakaihiihi me te tātari tukunga ki te koki 45° me te whakaata i te tohu whakahihiri ki te fluorophore i te wa e tuku ana i te tohu tuku ki te kaitirotiro.Ko nga whiriwhiringa dichroic tino pai me nga kaitarai kurupae he koi nga whakawhitinga i waenga i te whakaata nui me te whakawhitinga teitei, me te > 95% whakaata mo te whanui o te taitapa whakahihiri me te tuku o te > 90% mo te whanui o te taitapa tuku.Tīpakohia te tātari me te whai whakaaro ki te roangaru whakawhiti (λ) o te fluorophore, hei whakaiti i te kotiti-marama me te whakanui i te tauwehenga tohu-ki-haruru o te ahua o te ahua.
Ko te whakaata dichroic i roto i tenei ahua ko te DM505, na te mea ko te 505 nanometers te roangaru i te 50% o te whakawhitinga teitei mo tenei whakaata.Ko te anau tuku mo tenei whakaata e whakaatu ana i te tukunga teitei i runga ake i te 505 nm, he heke nui o te tuku ki te taha maui o te 505 nanometers, me te whakaata nui ki te taha maui o te 505 nanometers engari kei te mau tonu etahi tuku i raro i te 505 nm.
He aha te rereketanga i waenga i nga whiriwhiringa haerenga roa me nga whiriwhiringa paanui?
Ka taea te wehewehe i nga whiriwhiringa rererangi ki nga momo e rua: te haere roa (LP) me te haere roopu (BP).
Ka tukuna e nga whiriwhiringa haere roa nga roangaru roa me te aukati i nga mea poto ake.Ko te roangaru tapahi ko te uara i te 50% o te tuku teitei, a ko nga roangaru katoa i runga ake i te tapahi ka tukuna e nga whiriwhiringa roa.He maha nga wa ka whakamahia i roto i nga whakaata dichroic me nga tātari tuku.Me whakamahi nga whiriwhiringa Longpass ina hiahia ana te tono ki te kohinga tukunga nui rawa atu me te kore e pai ana te whakahāweatanga matakite, e tika ana mo nga rangahau e whakaputa ana i tetahi momo tuku i roto i nga tauira he iti noa iho te taumata o te rewharewha o muri.
Ko nga whiriwhiringa paahi o te roopu ka tuku noa i tetahi roopu roangaru, ka aukati i etahi atu.Ka whakaitihia te korero whakawhiti ma te tuku noa i te waahanga kaha rawa o te awhiowhio a fluorophore ka tukuna, ka whakaiti i te haruru autofluorescence me te whakapai ake i te ōwehenga tohu-ki-haruru i roto i nga tauira autofluorescence papamuri teitei, e kore e taea e nga whiriwhiringa roa te tuku.
E hia nga momo huinga tātari rewharewha ka taea e BestScope te tuku?
Ko etahi momo whiriwhiringa noa ko nga whiriwhiringa puru, matomato, me te ultraviolet.Ka rite ki te whakaatu i te ripanga.
| Tautuhi Tātari | Tātari Whakaoho | Whakaata Dichroic | Tātari Arai | rama arahina Ngaru Te roa | Taupānga |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485nm | ·FITC: Tikanga pareketo kareoro ·Acidine karaka: DNA, RNA · Auramine: Tubercle bacillus ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·Rhodamine, TRITC: Tikanga antibody fluorescent ·Propidium iodide: DNA ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | · Te mātaki i te rewharewha-aunoa ·DAPI: te whakapouri DNA ·Hoechest 332528, 33342: whakamahia mo te whakapouri Chromosome |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | · Catecholamines · 5-hydroxy tryptamine ·Tetracycline: Kohiwi, Niho |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640nm | ·Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Ko nga huinga whiriwhiringa e whakamahia ana i roto i nga whiwhinga korikori kua hangaia ki te taha o nga roangaru nui e whakamahia ana i roto i nga tono rererangi, he mea hanga huri noa i nga fluorophores tino whakamahia.Mo konei, ka whakaingoatia ano ki te fluorophore e whakaarohia ana mo te atahanga, penei i te DAPI (puru), FITC (matomato), TRITC (whero) poraka tātari.
| Tautuhi Tātari | Tātari Whakaoho | Whakaata Dichroic | Tātari Arai | rama arahina Ngaru Te roa |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450nm |
| Texas Whero | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560nm |
Me pehea koe ki te whiriwhiri i te tātari rewharewha?
1. Ko te kaupapa o te kowhiri i te tātari korikori ko te tuku i te rama karerewharewha/whakaputa kia haere i roto i te mutunga o te atahanga ka taea, me te aukati katoa i te rama whakaihiihi i te wa ano, kia whiwhi ai i te tauwehenga tohu-ki-haruru teitei.Ina koa mo te tono o te whakaihiihi multiphoton me te katoa o te karu whakaata whakaata o roto, ko te haruru ngoikore ka nui te whakararu i te paanga o te whakaahua, no reira he teitei ake te whakaritenga mo te tohu ki te haruru.
2. Me mohio ki te hikaka me te tukunga o te hihinga o te fluorophore.Ki te hanga i te huinga tātari rewharewha e whakaputa ana i te ahua o te kounga teitei, te ahua rereke-nui me te papamuri pango, te hihiko me nga whiriwhiringa tukunga me eke ki te tuku teitei me te iti o te ripple passband ki runga i nga rohe e rite ana ki nga tihi whakaihiihi fluorophore me nga tukunga.
3. Whakaarohia te mauroa o nga whiriwhiringa rewharewha.Ko enei whiriwhiringa me noho parakore ki nga puna marama kaha e whakaputa ana i te rama ultraviolet (UV) tera pea ka "wera", ina koa ko te tātari whakahihiko i te mea ka pa ki te tino kaha o te puna whakamarama.
Nga Rerekē Rerekē Tauira Whakaahua
Ko nga rauemi ka kohia, ka whakaritea i runga i te Ipurangi, ka whakamahia mo te ako me te whakawhitiwhiti korero.Mena he takahi, tena koa whakapiri mai ki a maatau ki te whakakore.
Wā tuku: Tihema-09-2022